Breeding method for promoting germination of pinellia ternate seeds and application of breeding method
附图说明 图1对照组与摩西斗管囊霉XJ01组出苗对比试验结果。 图2对照组与根内根孢囊霉BJ09组出苗对比试验结果。 技术领域 本发明属于中药材种子繁育技术领域，具体涉及一种促进半夏种子出苗的繁育方法及其应用。 具体实施方式 本发明提供了一种促进半夏种子出苗的繁育方法，包括如下步骤：将摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉添加至土壤，然后播种半夏种子，覆土，保持恒定温度和湿度繁育。本发明所述摩西斗管囊霉为摩西斗管囊霉XJ01，所述根内根孢囊霉为根内根孢囊霉BJ09，均购买于北京市农林科学院植物营养与资源环境研究所“丛枝菌根真菌种质资源库”(BGC)。本发明所述摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉的用量为30～100g·m-2，优选为50g·m-2。本发明所述摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉的用量以半夏种子的种植面积为基础设定。本发明所述摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉与灭菌细沙混匀后，均匀洒至土壤中。本发明所述半夏种子采用双氧水消毒，然后用无菌水反复冲洗干净。本发明将灭菌后的半夏种子均匀洒于混有摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉的土壤表面。 在本发明中，所述半夏种子的获取方法为：将采集的有性繁殖半夏果实置于35～60目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于2～6℃冰箱保存。本发明所述半夏种子处理中，筛目优选为40目，冰箱保存温度优选为4℃。本发明所述半夏果实采集的方法为：在半夏规范化种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对抽薹20～40cm、佛焰苞长度4～10cm的半夏生殖器官套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。本发明采集的半夏果实应为饱满成熟的半夏果实。 在本发明中，所述土壤为灭菌的细沙。本发明所述灭菌的细沙的制备方法包括：将购买的细沙用纱袋装好后置于高压灭菌锅内灭菌。作为一种实施例，本发明可将灭菌的细沙制作成沙垄用于播种半夏种子；所述沙垄的规格为高20cm、宽80cm、长5m。作为另一种实施例，本发明可将灭菌的细沙放于花盆中用于播种半夏种子，所述花盆内部用石灰水浸泡消毒后于紫外光下杀菌。 在本发明中，所述覆土为灭菌的腐殖土，所述覆土的厚度为1～5cm，优选为3cm。本发明所述覆土后的繁育温度为23～28℃、湿度为65～75％，优选为温度25℃，湿度为70％。 本发明还提供了一种繁育方法在促进半夏种子出苗和种苗生长中的应用。本发明所述方法可有效提高半夏种子出苗率，且种苗出苗快，出苗质量好。 在本发明中，若无特殊说明，所有的原料组分均为本领域技术人员熟知的市售商品。 下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。 实施例1一种利用摩西斗管囊霉促进半夏种子出苗的繁育方法 (1)每年7月～10月在半夏种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对其抽薹20～40cm，佛焰苞长度为4～10cm的生殖器官进行套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉掉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。将采集的有性繁殖果实置于40目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于4℃冰箱保存； (2)于每年7月份之前选择平整水泥地面并用自来水反复冲洗4～5遍后在其表面均匀喷洒石灰水消毒； (3)将购买的细沙用纱袋装好后置于高压灭菌锅内灭菌，将灭菌细沙置于地面上制成高20cm、宽80cm、长5m的沙垄； (4)另用灭菌细沙与摩西斗管囊霉搅拌均匀洒于沙垄上，以半夏种子种植面积计算，摩西斗管囊霉用量为50g·m-2； (5)将已备好的半夏有性繁殖种子采用双氧水消毒后用无菌水反复冲洗干净均匀洒于沙垄表面，然后用灭菌腐殖土覆盖，覆盖厚度为3cm。保持温度25℃、湿度70％条件下繁育20天。每天观察统计出苗数量，结果统计可知，半夏种子出苗率可达90％。 实施例2利用摩西斗管囊霉促进半夏种子出苗繁育的盆栽对比实验 (1)每年7月～10月在半夏种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对其抽薹20～40cm，佛焰苞长度为4～10cm的生殖器官进行套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉掉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。将采集的有性繁殖果实置于40目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于4℃冰箱保存； (2)将购买的花盆内部用石灰水浸泡消毒后于紫外光下杀菌； (3)将购买的细沙用纱袋装好后置于高压灭菌锅内灭菌，将灭菌细沙置放入已灭菌的花盆内； (4)另用灭菌细沙与摩西斗管囊霉XJ01搅拌均匀洒于已有灭菌细沙的花盆的表面，以半夏种子种植面积计算，摩西斗管囊霉用量为50g·m-2，对照组(CK)只用灭菌细沙不混摩西斗管囊霉XJ01； (5)将已备好的半夏有性繁殖种子采用双氧水消毒后用无菌水反复冲洗干净均匀洒于混有摩西斗管囊霉的表面后用灭菌土覆盖，覆盖厚度为3cm。保持温度25℃、湿度70％条件下繁育20天。每天定时观察，记录第一次出苗的时间。出苗后分别在第15天和第20天，随机5点法，每点10·10cm2取样统计半夏种子数量，根据半夏种子发芽情况统计出苗率，根据发芽种子根茎叶生长长度判断生长发育情况，采用Excel 2007进行数据分析。CK组与摩西斗管囊霉XJ01组具体统计对比结果见表1和图1。 由表1和图1所示，有摩西斗管囊霉侵染的半夏种子第11天出苗，种苗出苗快，20天出苗率可达90％以上，种苗生长长度达32.36±10.06mm，种苗生长发育好；而对照组未侵染摩西斗管囊霉的半夏种子第14天出苗，种苗出苗慢，20天出苗率只有50％左右，种苗生长长度为4±2.21mm，种苗生长较差。 表1对照组和摩西斗管囊霉XJ01组统计结果
实施例3一种利用根内根孢囊促进半夏种子出苗的繁育方法 (1)每年7月～10月在半夏种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对其抽薹20～40cm，佛焰苞长度为4～10cm的生殖器官进行套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉掉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。将采集的有性繁殖果实置于40目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于4℃冰箱保存； (2)于每年7月份之前选择平整水泥地面并用自来水反复冲洗4～5遍后在其表面均匀喷洒石灰水消毒； (3)将购买的细沙用纱袋装好后置于高压灭菌锅内灭菌，将灭菌细沙置于地面上制成高20cm、宽80cm、长5m的沙垄； (4)另用灭菌细沙与根内根孢囊霉搅拌均匀洒于沙垄上，以半夏种子种植面积计算，根内根孢囊霉用量为50g·m-2； (5)将已备好的半夏有性繁殖种子采用双氧水消毒后用无菌水反复冲洗干净均匀洒于沙垄表面后用灭菌土覆盖，覆盖厚度为3cm。保持温度25℃、湿度70％条件下繁育20天，半夏种子出苗率可达90％。 实施例4利用根内根孢囊霉促进半夏种子出苗繁育的盆栽对比实验 (1)每年7月～10月在半夏种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对其抽薹20～40cm，佛焰苞长度为4～10cm的生殖器官进行套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉掉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。将采集的有性繁殖果实置于40目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于4℃冰箱保存； (2)将购买的花盆内部用石灰水浸泡消毒后于紫外光下杀菌； (3)将购买的细沙用纱袋装好后置于高压灭菌锅内灭菌，将灭菌细沙置放入已灭菌的花盆内； (4)另用灭菌细沙与根内根孢囊霉BJ09搅拌均匀洒于已有灭菌细沙的花盆的表面，以半夏种子种植面积计算，根内根孢囊霉BJ09用量为50g·m-2对照组(CK)只用灭菌细沙不混根内根孢囊霉BJ09； (5)将已备好的半夏有性繁殖种子采用双氧水消毒后用无菌水反复冲洗干净均匀洒于混有根内根孢囊霉的表面后用灭菌土覆盖，覆盖厚度为3cm。保持温度25℃、湿度70％条件下繁育20天。每天定时观察，记录第一次出苗的时间。出苗后分别在第15天和第20天，随机5点法，每点10·10cm2取样统计半夏种子数量，根据半夏种子发芽情况统计出苗率，根据发芽种子根茎叶生长长度判断生长发育情况，采用Excel 2007进行数据分析。CK组与根内根孢囊霉BJ09组具体统计对比结果见下表2和下图2。 由表2和图2所示，有根内根孢囊霉侵染的半夏种子第10天出苗，种苗出苗快，20天出苗率可达90％，种苗生长长度为75.80±13.59mm，种苗生长发育好；而对照组未侵染根内根孢囊霉的半夏种子第14天出苗，种苗出苗慢，20天出苗率只有50％左右，种苗生长长度为4±2.21mm，种苗生长较差。 表2对照组和根内根孢囊霉BJ09组统计结果
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。 背景技术 半夏Pinelliaternate(Thunb.)Breit.是天南星科半夏属多年生草本植物，别名麻芋子、三叶半夏、老鸦芋头、地巴豆等。主要分布于中国华东、华北以及长江流域，为中国传统常用药材。以块茎入药，具有燥湿化痰、降逆止呕之功效，在196个处方中出现频率居于第22位，应用十分广泛，具有重要药用价值 半夏在自然进化中，有性繁殖系数低，形成了以株芽、块茎部位无性繁殖为主的生殖方式。半夏的繁殖方法主要有块茎繁殖、珠芽繁殖、组培育苗、人工种子、种子繁殖等。块茎于秋季半夏倒苗后进行采挖，采收的块茎可用沙藏法或自然堆藏法保存，进行后续块茎繁殖；珠芽生于叶柄基部，一般在倒苗后收集，可用沙藏法、自然堆藏法及温棚贮藏法保存，进行后续珠芽繁殖；半夏植物组织培养主要以茎尖、叶片、叶柄和块茎作为外植体进行，组培方式为：①外植体→愈伤组织诱导→愈伤组织增殖→丛生芽诱导→丛生芽增殖→丛生芽生根，②外植体→丛生芽诱导→丛生芽增殖→丛生芽生根。目前，针对半夏块茎繁殖、珠芽繁殖的报道较多，生产上也基本采用该两种方法；半夏种子的发芽率低，生产周期长，种子繁殖在生产中使用不多，这导致了半夏种子繁殖的研究以及应用极少。截止目前，还未见采用摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉提高半夏种子出苗率的相关报道。 发明内容 本发明提供了一种促进半夏种子出苗的繁育方法及其应用，该方法可有效提高半夏种子出苗率以及种苗生长，种子出苗率高达90％以上。 为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案： 本发明提供一种促进半夏种子出苗的繁育方法，包括如下步骤：将摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉添加至土壤，然后播种半夏种子，覆土，保持恒定温度和湿度繁育。 优选的，所述摩西斗管囊霉为摩西斗管囊霉XJ01，所述根内根孢囊霉为根内根孢囊霉BJ09。 优选的，所述所述摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉的用量为30～100g·m-2。 优选的，所述半夏种子的获取方法为：将采集的有性繁殖半夏果实置于35～60目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于2～6℃冰箱保存。 优选的，所述半夏果实采集的方法为：在半夏规范化种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对抽薹20～40cm、佛焰苞长度4～10cm的半夏生殖器官套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉掉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。 优选的，所述土壤为灭菌的细沙。 优选的，所述半夏种子采用双氧水消毒，然后用无菌水反复冲洗干净。 优选的，所述覆土为灭菌的腐殖土，所述覆土的厚度为1～5cm。 优选的，所述温度为23～28℃，所述湿度为65～75％。 本发明提供了一种繁育方法在促进半夏种子出苗和种苗生长中的应用。 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果： 本发明首次利用摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉促进半夏种子出苗和种苗生长，试验结果统计出苗率高达90％以上，生长至第11天开始出苗，生长至第20天，种苗生长长度在32.36±10.06mm以上，相较于对照组，该方法显著提高了半夏种子的出苗率和种苗生长，且种子出苗快。 本发明繁育方法操作简便易行，在生产上极大的降低采用块茎或者珠芽繁殖的成本，也有效降低块茎或者珠芽繁殖所带来的病害发生率。 The invention provides a breeding method for promoting germination of pinellia ternate seeds and application thereof, and belongs to the technical field of seed breeding of traditional Chinese medicinal materials. The method provided by the invention comprises the following steps: adding tubulophyllum mosseae or root interior root cyst into soil, then sowing pinellia ternate seeds, covering soil, and keeping constant temperature and humidity for breeding. According to the method disclosed by the invention, the selected tubulosporium mosseae or tubulosporium intraradices can effectively promote seedling emergence of the pinellia ternate seeds, the seedling emergence speed is high, the seedling emergence rate is as high as 90%, and the seedlings grow well; the breeding method is simple and easy to implement, the cost of tuber or bulbil breeding is greatly reduced in production, and meanwhile the disease occurrence rate caused by tuber or bulbil breeding is effectively reduced. 1.一种促进半夏种子出苗的繁育方法，其特征在于，包括如下步骤：将摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉添加至土壤，然后播种半夏种子，覆土，保持恒定温度和湿度繁育。 2.如权利要求1所述的繁育方法，其特征在于，所述摩西斗管囊霉为摩西斗管囊霉XJ01，所述根内根孢囊霉为根内根孢囊霉BJ09。 3.如权利要求1或2所述的繁育方法，其特征在于，所述摩西斗管囊霉或根内根孢囊霉的用量为30～100g·m-2。 4.如权利要求1所述的繁育方法，其特征在于，所述半夏种子的获取方法为：将采集的有性繁殖半夏果实置于35～60目筛中搓掉假种皮后晾晒，装瓶后置于2～6℃冰箱保存。 5.如权利要求4所述的繁育方法，其特征在于，所述半夏果实采集的方法为：在半夏规范化种植基地内，选择处于有性生长的半夏植株，对抽薹20～40cm、佛焰苞长度4～10cm的半夏生殖器官套袋，套袋前将佛焰苞内连接雄蕊和雌蕊的突环用剪刀剪掉，雄蕊花粉掉落至雌蕊并结实，待果实成熟自然掉落后集中收集。 6.如权利要求1所述的繁育方法，其特征在于，所述土壤为灭菌的细沙。 7.如权利要求1所述的繁育方法，其特征在于，所述半夏种子采用双氧水消毒，然后用无菌水反复冲洗干净。 8.如权利要求1所述的繁育方法，其特征在于，所述覆土为灭菌的腐殖土，所述覆土的厚度为1～5cm。 9.如权利要求1所述的繁育方法，其特征在于，所述温度为23～28℃，所述湿度为65～75％。 10.如权利要求1～9任意一项所述的繁育方法在促进半夏种子出苗和种苗生长中的应用。统计 对照组 摩西斗管囊霉XJ01组 出苗时间(d) 14 11 15d出苗率(％) 10.23±1.54 60.38±4.71 20d出苗率(％) 50.34±3.35 89.61±5.47 20d苗生长长度(mm) 4±2.21 32.36±10.06 统计 对照组 根内根孢囊霉BJ09组 出苗时间(d) 14 10 15d出苗率(％) 10.23±1.54 71.45±5.34 20d出苗率(％) 50.34±3.35 90.56±2.67 20d苗生长长度(mm) 4±2.21 75.80±13.59